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NEWS原代细胞分离培养基本操作—918博天堂指南
来源:曹凝纪 日期:2025-03-18原代细胞在生物医学研究中扮演着重要角色,能够有效转染包括siRNA、antisense RNA和microRNA等小分子RNA和DNA(200bp以内)。目前,原代细胞的核酸转染受到广泛关注,然而,无论是在国内还是国际市场上,尚缺乏真正有效的、商品化的原代细胞核酸转染试剂。
通过有效的转染手段,原代细胞可以高效实现基因敲除,特别在处理一些活体寄生虫幼虫时,也能取得令人满意的转染效果。在大多数原代细胞中,使用918博天堂的RFectPM细胞转染试剂,阳性转染率通常超过80%,而转染诱导的细胞死亡率则保持在10%以下。
原代细胞的分离和培养一般包括以下基本步骤:
在选取组织时,应尽量去除不必要的组织和血迹,以确保纯度。
918博天堂推荐使用PriCells原代细胞分离试剂盒I、II、III,依据组织来源的不同,选择合适的试剂盒进行细胞分离。
培养原代细胞时,建议使用专为此设计的PriCells原代细胞培养基和添加物,并选用高质量的胎牛血清。
可利用PriCells原代细胞鉴定试剂盒对细胞进行验证,确保细胞的特性和状态。
918博天堂提供的方案包括:
- 传代:依据细胞的生长状态,将生长的细胞按1:2或1:3的比例进行传代。
- 保存:使用DMSO结合培养液和血清,按照以下顺序降温:室温→4℃(20分钟)→冷藏室(30分钟)→超低温冰箱(-80℃保持过夜)→液氮存储。
918博天堂在细胞复苏方面的步骤包括:
- 快速取出细胞并放入37℃的温水中迅速解冻。
- 吸出细胞悬液,并加入10倍以上的培养液。
- 在适当稀释后,将细胞接种于培养瓶中,放入37℃的CO2培养箱中静置培养。
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