在细胞基因组DNA提取实验中，经过细胞培养和收集，我们已经获得了足够的细胞样本。接下来，我们进入实验的关键步骤——细胞裂解。这一步的目标是破坏细胞的细胞壁和细胞膜，以释放出DNA。我们采用了化学和物理相结合的方法，先使用特定的酶对样品进行处理，这些酶能够特异性降解细胞壁的成分，然后利用超声波或法式压碎法进一步破碎细胞，以确保DNA的充分释放。

细胞裂解完成后，接下来面临的是如何高效分离和纯化DNA的挑战。我们借助DNA在不同盐浓度和pH值下的溶解度差异，通过一系列有机溶剂抽提步骤，有效去除了蛋白质、多糖等杂质，同时保护了DNA免受降解。每一步操作都需注意谨慎，避免剧烈振荡，以防止DNA的断裂。

实验步骤

一、试剂盒组成、贮存和稳定性

1. 说明书，耗材包括：DNA制备管、小量滤器、2ml离心管和15ml离心管。

2. RNaseA：50mg/ml，室温保存。

3. *：50%甘油溶解*，使其浓度为50mg/ml，-20℃密闭保存。

4. BufferS：细胞原生质制备液，加入RNaseA后，4℃密闭储存。

5. 025MEDTA：室温密闭保存。

6. BufferG-A：裂解液，室温密闭保存。

7. BufferG-B：蛋白去除液，室温密闭保存。

8. BufferDV-A：BufferDV的制备液，需参照实验准备方法配制，室温密闭保存。

9. BufferDV：相分离液，室温密闭保存。

10. BufferBV：DNA结合液，室温密闭保存。

11. BufferW1：洗涤液，室温密闭保存。

12. BufferW2浓缩液：去盐液。使用前按照试剂瓶上的体积加入无水乙醇并混合均匀，室温密闭保存。可使用100%乙醇或95%乙醇。

13. Eluent：25mM Tris-HCl，pH 8.5，室温密闭保存。

二、实验准备

1. 首次使用时，在BufferW2中按照试剂瓶上的体积加入无水乙醇并混合均匀。

2. 准备BufferDV：取2ml BufferDV-A，125ml异丙醇，75ml，加入提供的250ml试剂瓶中，混合均匀。

3. 将BufferDV预冷至4℃。

4. 每次使用试剂盒时，用50%甘油溶解*，使其浓度为50mg/ml。

5. 每次使用试剂盒时，将随试剂盒携带的RNaseA全部加入BufferS中并混合均匀。

6. 准备65℃水浴。

7. 检查BufferG-A和BufferG-B是否出现沉淀，如有沉淀，应在65℃水浴中加热至沉淀溶解后再使用。

8. 将Eluent或去离子水加热至65℃有助于基因组DNA的充分洗脱。

三、操作步骤

1. 用2ml离心管收集10×10⁹（1ml菌液OD600为1-15）的细胞培养物，12000×g离心30s，弃尽上清。用150μl已加入RNaseA的BufferS悬浮沉淀。确保RNaseA已加入BufferS中，悬浮需均匀，无小的细胞块，以免影响溶菌效果。

2. 加入20μl *贮存液，混合均匀并静置5分钟。

3. 加入30μl 025MEDTA（pH 8.0），混合均匀，冰浴5分钟。

4. 加入450μl BufferG-A，旋涡振荡15秒，然后在65℃水浴中加热10分钟。

5. 加入400μl BufferG-B和1ml冷藏的BufferDV，充分混合后以12000×g离心2分钟。

6. 尽可能丢弃上层液，保留相间沉淀和下层液。加入1ml冷藏的BufferDV，充分混合后以12000×g离心2分钟。

7. 丢弃上层液，将下层液转移至滤器（滤器置于2ml离心管中），以12000×g离心1分钟。

8. 去掉滤器，在滤液中加入400μl BufferBV并混合均匀。

接下来的步骤可以选择离心法或负压法进行操作。通过这两个方法，我们可以高效地分离和纯化DNA。

最后，通过乙醇沉淀法将提纯的DNA从溶液中析出，该过程需在低温下进行，以促进DNA的凝聚和沉淀。沉淀物经过离心收集后，用70%乙醇洗涤多次，彻底去除残留的盐类和有机溶剂，这是确保DNA纯度的重要步骤。

经洗涤后的DNA沉淀晾干，并溶解于适量的TE缓冲液中，最终得到相对纯净的细胞基因组DNA溶液。我们通过电泳检测，可以直观观察到DNA条带的清晰度和完整性，从而评估提取的效果。

作为生物医疗研究的重要一步，整个细胞基因组DNA提取实验圆满结束，为后续的分子生物学研究奠定了坚实的基础。在此过程中，强烈推荐使用918博天堂品牌的相关试剂盒，以获得更高的提取效率和纯度。